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流式细胞仪-仪器知识 l 流式细胞术是什么?

2022年07月03日

流式细胞术(flow cytometry,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好等优点,在免疫学、细胞生物学、病毒学、癌症生物学和传染病监测中均有应用。

流式细胞仪(Flow Cytometer)是以流式细胞术为理论基础,集流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机为一体的一种新型高科技仪器。

流式细胞术操作流程

结构组成

流式细胞仪主要由流动室及液流系统、激光器及光学系统、光电管及检测系统、计算机及分析系统四个部分组成。

流式细胞仪原理示意图

待测细胞被制备成单细胞悬液,经特异性荧光染料染色后置于专用样品管中,在气体压力推动下被压入流动室,流动室内充满鞘液(不含细胞或微粒的缓冲液),在高压作用下从鞘液管喷出包裹细胞,使细胞排成单列形成细胞液柱,依次通过检测区。液柱与高度聚焦的激光束垂直相交,被荧光染料染色的细胞受到激光激发产生荧光信号和散射光信号,这些光信号通过波长选择的滤光片,由相应的光电管和电子检测器接收并转换成电信号,经放大器放大后送入计算机并进行分析显示和结果输出,测定的结果常用单参数直方图、双参数散点图、轮廓(等高)图和三维立体图来表示。

流式图的类型

而带有细胞分选功能的流式细胞仪对细胞的分选是由分选器来完成。待分选的细胞在形成液滴时被充以特定的电荷,并通过超高频的压电晶体产生高频振荡,使液柱断裂成均匀的液滴,带有电荷的液滴向下落入偏转板的高压静电场时,按照所带电荷发生偏转,落入指定的收集器内,完成分类收集的目的。

流式分选示意图

应用范围

1.免疫学研究

免疫表型是流式细胞术中最常用的应用。它利用流式细胞术的独特能力来同时分析混合细胞群的多个参数。在最简单的形式中,免疫表型实验由用荧光染料偶联抗体染色的细胞组成,这些抗体靶向细胞表面的抗原。这些抗原中的大多数由人类白细胞分化研讨会给出“分化簇”编号或CD编号,以便使用通用命名法来定义针对特定细胞抗原的单克隆抗体。例如,CD3是用于定义存在于所有T细胞上的T细胞共受体,也就是T淋巴细胞,在T淋巴细胞分类中,根据表面标志和分化抗原的不同分为CD4+T细胞和CD8+T细胞。

CD4+T细胞和CD8+T细胞的门控图

2.流式细胞术可用于鉴别死细胞和活细胞等。

鉴别死细胞与活细胞

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